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    N-亞硝基二甲胺（NDMA）又稱二甲基亞硝胺，具有較強的肝臟毒性，屬于亞硝胺類遺傳毒性雜質，被世界衛(wèi)生組織國際癌癥研究機構認定為 2A  類致癌物，在較低濃度時即可造成人體遺傳物質的損傷。二甲雙胍是 2 型糖尿病早期的標準藥物，具有降糖作用，且低血糖風險小，價格低廉，是目前應用最廣范的甲類降糖藥物之一，在二甲雙胍中檢測出 NDMA 可能會對用藥安全性產(chǎn)生較大威脅。

    本文參考《中國藥典》2020 年版四部通則 0521 氣相色譜法與 0431 質譜法，建立了使用氣相色譜-三重四極桿串聯(lián)質譜儀EXPEC 5231 測定鹽酸二甲雙胍緩釋片中 N-亞硝基二甲胺的快速且高效的檢測方法。

實驗部分

標準品、試劑和設備

    儀 器：GC 2000 氣相色譜、EXPEC 5231 三重四極桿串聯(lián)質譜儀。

    標準品：N-亞硝基二甲胺（CAS 62-75-9）與氘代 N-亞硝基二甲胺 D6（CAS 17829-05-9）標準溶液購自阿爾塔科技有限公司，于-20 ℃冰箱保存。

    試  劑：鹽酸與氯化鈉（優(yōu)級純）；二氯甲烷與甲醇（色譜級）；實驗用水

（超純水）。

    樣 品：鹽酸二甲雙胍緩釋片購自石家莊市新華藥業(yè)有限責任公司。

測試方法

化合物監(jiān)測離子對、碰撞電壓(CE)等參數(shù)見下圖：

 圖 1 化合物質譜參數(shù)

樣品前處理

    使用瑪瑙研缽將鹽酸二甲雙胍緩釋片研磨為細粉，精確稱取 1.1 g 粉末（約相當于鹽酸二甲雙胍 500 mg）于 50 mL 離心管中，加入1 μg/mL 氘代 N-亞硝基二甲胺 D6 溶液 0.2 mL，加入 1 mol/L 鹽酸溶液 10 mL，渦旋振搖混合，加入 3.5 g 氯化鈉與 10 mL 二氯甲烷，渦旋混合，振搖 10 min，于 4000 rpm 離心 10 min，吸取二氯甲烷層經(jīng) 0.22 μm 疏水性濾膜過濾，取濾液于 1.5 mL 棕色進樣瓶上機測試。

空白與加標樣品譜圖

為排除儀器干擾，分別在測樣前、測樣后、高濃度標液測試后插入空白溶劑，如圖 2 所示，對應時間內無干擾峰。2.4 ng/mL 標準溶液如圖 3 所示，N-亞甲基二甲胺的保留時間為 5.16 min，N-亞甲基二甲胺-D6 保留時間為 5.15 min。

 圖 2 空白譜圖

圖 3 2.4 ng/mL 標準品測試譜圖

線性和靈敏度

    使用二氯甲烷稀釋 N-亞硝基二甲胺標準溶液（0.5 ng/mL、0.8 ng/mL、2.4 ng/mL、 6 ng/mL、12 ng/mL、60 ng/mL、100 ng/mL），內標添加濃度為 20 ng/mL，以定量 離子相對峰面積為縱坐標（Y），目標物標準溶液的質量濃度為橫坐標（X），權重 1/X，采用內標法擬合后的標準曲線如圖所示：在 0.5-100 ng/mL 線性范圍內，線性系數(shù) R2 在 0.999 以上，準確度在 94.70~108.30%，線性良好；以 0.8 ng/mL 標準溶液進樣，按照 S/N=10 和 S/N=3 計算，定量限為 0.456 ng/mL，檢出限為 0.137 ng/mL。

圖 4 N-亞硝基二甲胺標準曲線圖

圖 5 0.8 ng/mL N-亞硝基二甲胺定性定量譜圖

精密度

    制備 N-亞硝基二甲胺添加量為 0.8 ng/mL、2.4 ng/mL、6.0 ng/mL 的標品溶液，連續(xù)測試 6 次，計算保留時間與峰面積的相對標準偏差 RSD 值。

    0.8 ng/mL 保留時間RSD 為 0.08%，峰面積 RSD 為 4.84%；2.4 ng/mL 保留時間RSD為 0.09%，峰面積 RSD 為 6.05 %；6.0 ng/mL 保留時間 RSD 為 0.09%，峰面積 RSD為 3.86%；穩(wěn)定性良好。

回收率

    對空白二甲雙胍緩釋片樣品進行加標回收率測試，加標濃度分別為 0.8 ng/mL、2.4 ng/mL、6 ng/mL，連續(xù)進樣 6 針。

    0.8 ng/mL 回收率在93.24%~108.05%之間；2.4 ng/mL 回收率在 97.65%~109.11%之間；6.0 ng/mL 回收率在 84.31%~92.28%之間；

樣品測試

    按照 2.3 中樣品前處理方法對鹽酸二甲雙胍緩釋片進行處理，2 樣品平行 2 次，計算濃度在 0.32-0.45 ng/mL，平均濃度為 0.39 ng/mL，即 3.55 μg/kg，檢測結果小于 LOQ。

圖 6 樣品測試批處理

圖 7 樣品中目標物與內標定性定量譜圖

結論

    本文建立了一種使用譜育科技三重四極桿氣質聯(lián)用儀 EXPEC 5231 測定鹽酸二甲雙胍緩釋片中 N-亞硝基二甲胺的方法，考察了方法的線性、靈敏度、精密度、回收率等，結果表明：在 0.5-100 ng/mL 線性范圍內，線性系數(shù) R2 在 0.999 以上；定量限為 0.456 ng/mL，檢出限為 0.137 ng/mL；穩(wěn)定性測試，保留時間 RSD 小于 0.09%，峰面積 RSD 小于 6.05 %；低中高濃度加標回收率在 84.31-109.11 %；本方法可對鹽酸二甲雙胍緩釋片中 N-亞硝基二甲胺進行靈敏、準確、快速的定量分析。

設備與耗材方案

一、EXPEC 5231 系統(tǒng)標準配置詳情